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第十六节 尿总蛋白测定
对于尿总蛋白( urine total protein，u-TP)含量的测定，首先要人为地做2个“假设”:①所有蛋白质分子都是由纯多肽构成，氮含量的质量百分比为16%;②体液中每个蛋白质分子对测定反应都具有非常相似的特性。当然，实际情况更复杂。
目前，已经建立起许多特异性的尿总蛋白测定方法，重要的方法有:双缩脲法(根据所有蛋白质都含有肽键，在碱性溶液中能与铜离子发生双缩脲反应)、丽春红S法、邻苯三酚红钼络合显色法等。
关于尿总蛋白测定的标准问题。正常人混合血清经凯氏定氮法准确定值后，是常规总蛋白测定最佳的标准液。
一、检测方法
(一)双缩脲比色法
参阅本章第一节血清总蛋白双缩脲常规法测定。
(二)丽春红S法 【原理】
在尿液标本中，加入蛋白沉淀剂三氯乙酸和丽春红S染料后离心沉淀，蛋白-染料结合物被沉淀出来，将沉淀物加碱液溶解后，比色测定，计算蛋白含量。
【试剂】
三氯乙酸-丽春红S试剂原液 称取丽春红S 1.0g，溶解在300g/L三氯乙酸溶液1000ml中。
1.三氯乙酸-丽春红S试剂应用液 原液100ml用蒸馏水稀释至1000ml，在室温下数月稳定。
2.蛋白定性试剂 如100g/L磺基水杨酸乙醇溶液。
3.0. 2mol/L氢氧化钠溶液。
4.蛋白标准曲线 取蛋白标准液( 50g/L)用盐水稀释成每升含蛋白200mg、400mg、600mg、800mg、1000mg、1200mg、1600mg的标准液，各取100μl，与测定标本操作相同，用560nm波长比色，制成标准曲线。
【操作】
1.先作蛋白定性试验，估计尿液中蛋白质的浓度，依据蛋白浓度调整标本用量:
( 1) 1g/L以下时，标本用量为100μl。
( 2) 1～3g/L时，标本用量为50μl (测得值×2)。
( 3) 3～10g/L时，标本用量为10μl (测得值×10)。
2.取12mm×100mm的试管1支，按上述要求量加入标本，再加入三氯乙酸-丽春红S试剂1.0ml，混匀后以3500r/min离心10分钟，将上清液缓缓倒出后，倒置于滤纸上数分钟，并用小滤纸条吸去附着于管壁的多余试剂(注意勿触及管底沉淀物)。
3.加0.2mol/L氢氧化钠溶液2.0ml于沉淀物中，混合使沉淀溶解，用560nm波长测定吸光度，查标准曲线得蛋白含量。
【参考区间】
成人尿蛋白参考区间: 28.4～64.6mg/L (此参考区间引自试剂说明书)。
【注意事项】 1.方法学特点
丽春红S法比较灵敏，对白蛋白的敏感性远比球蛋白高。双缩脲法虽不太敏感，但能正确反映肾病患者尿中蛋白排泄量。
2.操作要求
离心沉淀后上清液必须全部倾去，但不能损失沉淀物，否则可影响比色结果。标本蛋白含量在0.1g/L以下时，可用标本1.0ml加试剂原液0.1ml，混匀，离心后弃去上清液，吸去管壁上多余试剂，加0.2mmol/L氢氧化钠溶液2.0ml检测。
3.干扰因素
本法较比浊法误差小，胆红素＜68μmol/L (即＜4mg/L)时对结果无影响;也不受室温的影响。
(三)邻苯三酚红比色法 【原理】
蛋白质和邻苯三酚红/钼酸盐形成红色复合物，显色强度与蛋白质浓度成正比。
【试剂】
购买成套商品化试剂盒。邻苯三酚红和钼酸钠。
【操作】
严格按照仪器使用说明书和配套试剂盒说明书操作。
收集新鲜随机尿或定时尿，用全自动生化分析仪进行检测。
【结果计算】
以定标品校准仪器后，在患者结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。
【参考区间】
成人尿蛋白参考区间:阴性或＜150mg/24h尿(参考区间引自《临床检验基础》第4版)。
【注意事项】
测定糖尿病患者的尿蛋白，可能会出现假阴性的结果。螯合剂可能干扰检测。
二、临床意义
在多数肾脏疾病中可观测到尿总蛋白浓度升高(蛋白尿)。原发性和继发性肾病可导致肾小球渗透性增加或肾小管再吸收能力下降，引起肾性蛋白尿;感染、出血或泌尿管的疾病可引起肾后性蛋白尿;尿液蛋白水平升高也可能与生理或心理压力和其他急性病症如发热等有关。